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DIY-in Vitro Pflanzen

ChrisV

ChrisV

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Hallo,
mal wieder ein neues Projekt von mir:
da ich andauernd probleme hatte mit Plagegeistern in den Pflanzen und erst bei meinem letzten Pflanzenkauf planarien dabei hatte kam jetzt die entscheidung, dass ich doch gern mal in vitro meine Pflanzen ziehen werde und dann so für neue bzw neu gemachte Becken auch die "Reinen" Pflanzen nutzen kann. sollte jemand schonmal etwas in der richtung Ernsthaft (Sterilisierte Pflanzen + Arbeitsbereich, wachstumsmedium etc) versucht haben bitte ich um tipps ;)

Ich habe nun nach einer gefühlten ewigkeit recherchieren folgende ausgangsbedingungen gefunden

1. Desinfizieren: sämtliche industriellen bleichmittel sind offensichtlich ein gutes Mittel, wichtig ist zuerst einen Teil der Pflanze mit Spross zu reinigen und dann das Meristem (IN der sprosspitze) nochmal kurz desinfizieren und reinigen; Moose sind allerdings empfindlicher bei dauer und Konzentration der Mittel
2. Wachstumsmedium 1: MS Medium mit Antibiotika, Saccharose und cytokinin (Pflanzenhormon für Seitenspross-bildung
3. Separieren und anwendung des gleichen Mediums nur ohne antibiotika
4. nachdem ich ein paar Pflanzen habe, kommen sie in ihre letzte Schale ohne hormone und als vergleich auch mit bewurzelungshormonen (Auxin)

...soweit zur Theorie...nächste woche werde ich den ersten Versuch starten mit cryptocoryne, Christmasmoos und Anubias
 
Hallo,
meinst du es ist nicht günstiger in vitro Pflanzen zu kaufen, inzwischen gibt es eine breite palette an entsprechenden Pflanze. Wenn du erst einmal Pflanzen aus einem sauberen Becken hast, kannst du Triebe aus diesen in andere Becken ohne Risiko einbringen.

Gruß
Christian
 
Hi,
also zuerst der wichtigste grund ist: ich mach gern solche projekte:P kann im Labor das alles machen an ner sterilen Arbeitsbank, mit Laborutensilien, nährmedien etc somit lass ich mir das nicht entgehen
und dann ists preislich garnicht mal soviel billiger, würde ich mir alles was ich benötige in nem online shop bestellen wärens pro Pflanzenbecher 50ct materialkosten komplett plus pflanzen die ich dahab und hoffentlich sauber genug bekomme :D

noch ein nachtrag: hatte wie evtl schon eingie auch den amateurversuch gestartet agar + dünger + Zucker in ner schale und dann pflanzen dazu...3 Tage danach wars alles voller bakterien
 
Hallo Chris,

wenn du einen Laborarbeitsplatz und die entsprechenden Utensilien bei dir auf der Arbeit zur Verfügung hast (mir steht auch ein komplettes analytische Labor zur Verfügung, samt Massenspektrometer :P ) dann ist das eine andere Sache. Ich bin davon ausgegangen, dass du das in den eigen 4 Wänden machen möchtest. Da hätte der Aufwand in keinem Verhältnis zu den Kosten gestanden.

Gruß
Christian
 
Hi Chris,

ich glaube nicht dass das ohne Reinbank vernünftig klappt, es sei denn man nimmt reichlich Antibiotikum ins Medium. Selbst mit Antibiotikum und Reinbank hab ich schonmal in unbehandelten Schalen (also völlig ohne Probe) Bakterien gefunden. Und natürlich Mundschutz in dieser Jahreszeit nicht vergessen beim Arbeiten, da ist man quasi ne dauerhafte Bakterienschleuder. :umpf:
 
Hallo,
vieleicht tut es statt Antibiotika auch Chinosol, ein Wund\Haut Desinfektionsmittel.
Wird von einigen Pflanzenzüchtern eingesetzt wird um zu verhindern das extrem langsam keimende Samen verpilzen.
Gibts für n paar eur in der Apotheke.
Mit der Dosierung müßtest du dann experimentieren, hatte das auch mal für einige Chilisamen eingesetzt.
Meine Dosierung war glaube ich eine Tablette aufn Liter Wasser.
Allerdings hab ich die Samen mit der Lösung nur eingesprüht.

gruß Niels
 
Hi,
jap dachte ich auch mit der sterilbank...ist sogar schon abgeklärt ;) medium wurd gestern autoklaviert, gläser werden heute und morgen dann werkzeug und DANN steht nix mehr im weg...chinosol? da guck ich mal, is ne überlegung wert!
@christian: ja das stimmt - ohne wird das sicher nix aber so werd ich dann mal berichten, sobald die ersten 2 wochen rum sind, ist ja auch der kritische part rum
 
Hi :)

ich denke das Werkzeug zu autoklavieren kannst du dir sparen. Bei Schere, Spatel und Pinzette reicht es eigentlich ordentlich mit Ethanol einzusprühen vor dem arbeiten, da bleibt wenig drüber. Vorallem da du mit den Pflanzen wahrscheinlich deutlich mehr Bakterien einschleppst, auch nach Desinfektion.
Kommt allerdings auf die Reinbank an. Wenn die für mediznische Zwecke genutzt wird, und nach deiner Arbeit da direkt noch wer anders dran will ist es natürlich zum Schutz der anderen Proben nötig. Ansonsten danach einfach das UV Programm anmachen.

Wie gut geeignet Chinosol für lebende Pflanzen ist weiß ich nicht, bei Samen funktionierts ganz gut. Allerdings können da leicht Rückstände auf den Pflanzen bleiben, was wiederrum nicht so gut für die spätere Verwendung im Aqurium ist.
 
So, sind eingepflanzt ;)
Vorbereitung war: gläser (größe wie die von babynahrung) autoklavieren, werkzeug mit ethanol und feuer vor jedem gebrauch desinfiziert, gläser aufgestellt mit keimfreiem Wasser, NaOCl lösung (einmal 2% einmal 0,25%) und ethanol. fertige Agarlösung (auf rat von der BTA habe ich allerdings keine antibiotika oder dergleichen mit drin) leider war kein Binokular oder Mikroskop frei, somit musste ich mich mit den Sprossen an sich begnügen bzw bei den Anubien habe ich zusätzlich als vergleich auch stücke mit Blättern dran genommen somit sind zumindest diese pflanzen an sich etwas unempfindlicher. Alle Pflanzen dann erstmal mit normalem Wasser gespült und zerstückelt
Hauptteil: in verschiedenen zeiten und konzentrationen der Waschlösung gebadet, immer wieder ausgewaschen dazwischen und mich dann näher an die Sprosspitze rangearbeitet. kurz nochmal ethanol und wasser und dann ab in die Gläser bzw Plastikbecher.
Habe Pro Pflanzenart 3-4 Ansätze, immer eine Pflanze Pro Behälter und die einzelteile dann gut verteilt, somit werde ich sehr bald sehen können was dann übrig bleibt :D
die meisten Hoffnungen hab ich bei ner utricularia - konnte etwas von nem neuen in vitro cup ergattern :)
 
Nach ner stressigen Woche mal ein kleines update:
Die Pflanzen waren zum großteil (16 von 20 gläsern) verpilzt...ernüchternd aber vorhersehbar, weiß nun dass ich zur Desinfektion höher konzentrierte mittel nehmen sollte. Die nicht befallenen pflanzen bzw Triebe.habe ich gestern nochmal neu desinfiziert mit hypochlorid und H2O2 und in frische behältnisse (1,5ml eppensorf.tubes) eingesetzt bis sie die ersten neuen Triebe Bilden
 
Hi,

schade zu hören aber das desinfizieren von solchen komplexen Strukturen gestaltet sich eigentlich immer schwierig.

Ich wollte mal fragen, wie du die Ableger nach dem setzen weiterkultivieren willst? Da muss ja für ne Weile die richtige Temperatur und vorallem genügend Licht her sonst klappt das wahrscheinlich nicht. Vorallem nach den Zellschädigungen durch die Desinfektionsmittel. Ich befürchte gerade die Eppis lassen nicht sehr viel Licht durch. Zumindest die, die wir haben sind eher milchig trüb, und eben dafür gemacht das nicht so viel Licht durch kommt da die meisten Präparate Licht eher nicht so gut vertragen. Vielleicht solltest du es mit Zellkulturflschen versuchen? Die sind ordentlich Lichtdurchlässig, allerdings wird da das setzen schwer. Oder vielleicht lassens ich auch ein paar Zellkulturplatten organisieren, die gibts mit mehreren Wells in unterschiedlichen Durchmessern. Da könnte man direkt mehrere Ansätze unterbringen, der Deckel ist Lichtdurchlässig, die sind gut zugänglich zum Stecken und wenn man nach dem Aufsetzen des Deckels diesen gut mit Gewebeband verklebt auch gut abgeschottet gegen Lufteindringen (falls sie nicht in einer sterilen Umgebung stehen bleiben sondern irgendwie auf die Fensterbank sollen oder so).

Viel Erfolg weiterhin
 
nach längerem mal wieder was vom Projekt:
das desinfizieren hatte bei sage und schreibe EINEM trieb cryptocoryne geklappt :D eppis warn kein thema da in dem stadium ja schon schwach durchkommendes Licht reicht vollkommen (auch um pilze und Bakterien aller farben wachsen zu lassen - rot, grün, gelb, weiß, blau). Ich habe darum auch vor zwei Wochen nochmal mit ner fertigen in vitro Pflanze ein paar ansätze gemacht: 2 von 10 haben ne pilzspore abbekommen. der rest schießt jetzt überal seitentriebe los - bilder gibts in 2 wochen wenn sichs lohnt mal was zu knipsen aber kanns chonmal sagen: küchenabzug, ethanol, hanschuhe, sterilisierte behältnisse (dampfkocher) UND steriles wasser ausm labor sind pflicht :)
 
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